Analise de mutacao nos exons 8 e 17 do gene KIT

Nota1- Mutacoes no exon 17 do gene KIT contribuem para o estabelecimento diagnostico de Mastocitose (D816V, N822K) Nota2- Mutacoes no exon 8 e 17 do gene KIT sao encontradas na frequencia de 25-35% em Leucemia Mieloide Aguda (LMA) positivas para os genes de fusao RUNX1/RUNX1T1 e CBFB-MHY11 (INV16) e, quando presentes, podem conferir prognostico desfavoravel . Entretanto, a deteccao da mutacao nao deve ser utilizada para restratificacao do grupo de risco original. Nota3- Estratificacao para uso de inibidor tirosina quinase em pacientes diagnosticados com Mastocitose. Rotina: Amostras contendo o segmento de interesse (exon 8 e 17) do gene KIT sao amplificadas por reacao em cadeia da polimerase (DNA PCR). Apos verificacao da amplificacao em gel de agarose, os produto de PCR de 163 pb (exon8) e 172 pb (exon17) produto sao purificados por colunas GFX (GE®), segundo especificacoes do fabricante e quantificados em aparelho Nanodrop. A reacao de sequenciamento bi-direcional e realizada utilizando-se Big Dye e a corrida eletroforetica capilar realizada em plataforma 3130xl (Applied Biosystems). Eletroferogramas sao analisados com o software Mutation Surveyor V3.3 (SoftGenetics LLC).